CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训班邀请函

发布时间:2020-01-14 13:33:05

 
尊敬的       :您好! 
 
CRISPR是继RNA干扰技术、高通量测序技术等之后生物科学发展历史上最具颠覆性技术之一,使用高效、迅速且简单,在生物医学研究领域引起一场巨变,并因此成为生物医学实验室常规技术。随着CRISPR基因治疗临床实验的初步成功,以及2018年的基因编辑婴儿事件预热,CRISPR技术被越来越多的研究人员用来改造人类基因以消除疾病,创造生命力更加顽强的植物,消灭病原体等。在过去的7年中CRISPR技术斩获了生命科学领域各种重量级奖项,包括生命科学突破奖,盖尔德纳国际奖等,《Science》年度突破、《Nature》年度人物均授予了CRISPR单碱基基因编辑技术的突破,2019年9月,北京大学邓宏魁组完成世界首例基因编辑治疗艾滋病和白血病,使CRISPR技术再一次成为生命科学的焦点。 
 
随着近几年的发展,研究者开发出越来越多基于CRISPR的新型基因编辑技术,例如CRISPR转录激活/抑制技术,基因定位,表观遗传修饰,单碱基基因编辑系统(BE2,BE3,ABE等),CRISPR基因突变检测系统(Sherlock、DETECTR),无修复模板基因敲入技术等。CRISPR/Cas9系统的应用更加便捷、高效,也更广泛,目前该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌等基因组精确修饰,成为科研人员的强大工具,基于CRISPR临床实验已经取得初步成功。 
 
为了让更多的科研人员及时全面的掌握CRISPR最新技术,并应用的相应的领域研究中。特于2020年2月22日至23日在北京举办CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训班。在带教教师的指导下,学员独立完成一系列全部实验,免费获得三份CRISPR/Cas9敲除质粒载体(可以用于哺乳动物、植物、真菌、细菌、斑马鱼、线虫等,共60种)。免费赠送sgRNA离线设计软件(有基因组DNA序列即可设计!) 
 
课程安排:
 

日期

时间

培训内容

授课老师

222

8:00-8:50

培训报到

刘刚博士

2008年博士毕业于中国科学院上海生命科学研究院,从事肿瘤干细胞,细胞衰老,肿瘤转移等细胞作用网络和通路的研究,并作为骨干研究人员参加了973计划项目、国家自然科学基金重点项目、在香港中文大学做为作为PostdocResearch fellow,从事研究工作。先后Nature Geneticscell researchPLOS one等期刊发表论文十余篇。

222

9:00-11:30

理论讲解:

一、基因编辑技术简介(三代基因编辑工具)

1. ZFN 2.TALEN 3.CRISPR

二、CRISPR/Cas9基因编辑技术原理

1. CRISPR/Cas9发现历史

2. CRISPR/Cas9作用机制解析

3. CRISPR/Cas9系统改造策略

13:00-17:00

理论讲解

一、sgRNA在线设计构建实战演练(1.靶基因序列查找2.sgRNA在线设计合成)

二、CRISPR/Cas9转染策略:

1.生物转染(慢病毒、腺相关病毒等)

2.物理转染 (电转核酸/RNP、显微注射、基因枪)

3.化学转染 (脂质体、阳离子聚合物)

三、CRISPR/Cas9 sgRNA效率检测,脱靶检测及解决策略

1、高保真Cas9espCas9Hifi-Cas9Cluster1-Cas9

223

9:00-11:30

理论讲解:

一、CRISPR技术应用解析

1.基因敲除(单基因敲除、多基因敲除、大片段删除、多靶点sgRNA载体构建策略)

2.基因敲入实战演练(gRNA选择、同源臂设计、导入,长片段导入策略/提高基因敲入效率策略,PITChHITICRISPR-转座酶高效基因敲入系统)

3.CRISPR在转录调控中的应用(转录激活、转录抑制系统)

4.CRISPR靶基因标记定位

二、CRISPR案例解析

1.基因敲除在小鼠模型构建、植物、细胞、细菌、真菌等中的应用案例解析

2.基于CRISPR的全基因组基因敲除高通量筛选策略(文库构建,选择,流程优化等)

3.基于CRISPR的全基因组转录激活/抑制高通量筛选策略(文库构建,选择,流程优化等)

三、CRISPR/Cas9与基因沉默技术(siRNAshRNA)系统比较。

13:00-17:00

理论讲解:

一、单碱基基因编辑技术简介及在基因治疗中的应用

1.HF2-BE2 2.BE3系统 3.ABE系统4.单碱基基因编辑脱靶克服。

二、基因CRISPR的基因检测系统

1CRISPR-Cas12a系统介绍(DETECTR)

2CRISPR-Cas13a系统介绍(SHERLOCK-多重病原菌检测)

三、CRISPR/Cas9系统在肿瘤和遗传病治疗中应用解析

1CRISPR结合免疫检查点抑制剂治疗肿瘤

2、单基因遗传病治疗(DMD、先天性黑朦、地中海贫血等)

3CRISPR治疗HIV-基因编辑婴儿解析

4CRISPR治疗HIV炎性白血病病例解析

四、新一代无模板基因敲入系统解析

1.  1CRISPR Primer-editing 基因敲入原理及应用

日期

时间

培训内容

223

18:00

实验操作:CRISPR/Cas9敲除质粒转染靶细胞

224

9:00-11:30

实验操作:一、CRISPR/Cas9基因表达载体克隆构建1.sgRNA设计合成

2.敲除载体选择及线性化

3.sgRNA连接,转化等

13:00-17:00

实验操作:

1.CRISPR/Cas9转染后靶DNA检测

2.靶基因修饰位点扩增及鉴定

3. CRISPR基因敲除效果检测

 
举办地点: 
 
北京市西城区德外大街11号康华伟业孵化器A325-A343(近北京师范大学) 
 
参加对象 
 
从事医学、生命科学、农学等领域科研工作者和高校教师及研究生。 
 
授课方式 
 
1.理论讲授。 
 
2.每位学员在辅导教师的指导下,独立完成实验操作。(可选) 
 
收费标准 
 
注册费:3200元/人,2020年2月13号之前汇款报名可以优惠至:3000元/人。实验操作课程需加500元/人。同一个单位三个人以上报名可以免费构建价值1500元的质粒一个;包括学费、资料费、试剂耗材费、其他材料费;免费提供工作午餐,住宿用自理。 
 
银行汇款 
 
北京微旋基因技术有限公司 
 
开户行: 中国建设银行北京宣武支行 
 
账 号:11001019500053058529 
 
备 注:银行转账的学员,请于汇款单备注栏内注明参会人姓名 
 
联系人 
 
郑老师 010- 53516075 sales@micro-helix.com  
 
 
 

 

 CRISPR 质 粒 清 单

 

Plant

#50588

pHSN401

CRISPR/Cas based plant genome editing and gene regulation; expresses 3×FLAG-NLS-zCas9-NLS, gRNA scaffold for insertion of target sequence (AtU6-26 promoter), Hyg resistance

#63142

pRGEB32

(Empty Backbone) Express sgRNA/PTG with rice snoRNA U3 promoter and Cas9 with rice ubiquitin promoter for Agrobacterium-mediated transformation.

#51295

pRGEB31

(Empty Backbone) Binary vector derived from pRGE31. Deliver sgRNA and Cas9 into plant. by agrobacterium mediated transformation.

Insect

#49330

pAc-sgRNA-Cas9

Expresses sgRNA and Cas9-Puro in Drosophila S2 cells

C.elegans

#47549

pDD162

Cas9 + sgRNA plasmid that can be modified to cleave any Cas9 target site in the C. elegans genome.

Yeast

Bateria

#43804

p415

Human Optimized S. pyogenes Cas9

#42875

pCRISPR

A crRNA expression plasmid for targeting a specific sequence

 

#84379

pRH2502

Expression of dcas9 D10A H840A from a TetR-regulated uvtetO promoter

#84380

pRH2521

Expression of sgRNA from a imyc promoter (Pimyc)

#61737

pCRISPomyces-2

Streptomyces expression of codon-optimized Cas9 and custom gRNA

#42876

pCas9

Bacterial expression of Cas9 nuclease, tracrRNA and crRNA guide

Zebrafish

#47929

pCS2-nCas9n

expression of an optimized Cas9 for genome-editing in zebrafish

Mammalian

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

#52970

FokI-dCas9

Expresses Fok1 nuclease domain fused to catalytically inactive Cas9 DNA-binding domain in mammalian cells

#61591

PX601

A single vector AAV-Cas9 system containing Cas9 from Staphylococcus aureus (SaCas9) and its sgRNA.

#42229

PX260

This plasmid separately encodes a human codon-optimized SpCas9, a tracrRNA and customizable crRNA.

#42230

PX330

A human codon-optimized SpCas9 and chimeric guide RNA expression plasmid.

#48138

PX458[GFP]

Cas9 from S. pyogenes with 2A-EGFP, and cloning backbone for sgRNA

#48139

PX459[Puromycin]

Cas9 from S. pyogenes with 2A-Puro, and cloning backbone for sgRNA (V2.0)

#48140

PX461

Cas9n (D10A nickase mutant) from S. pyogenes with 2A-EGFP, and cloning backbone for sgRNA

#48141

PX462[Cas9n,Puromycin]

Cas9n (D10A nickase mutant) from S. pyogenes with 2A-Puro, and cloning backbone for sgRNA

#50661

pCW-Cas9[Tet-on,Puromycin]

Inducible lentiviral expression of SpCas9

#52963

LentiGuide-puro-Vector

Expresses S. pyogenes CRISPR chimeric RNA element with customizable sgRNA from U6 promoter and puromycin resistance from EF-1a promoter. Lentiviral backbone.

#52962

lentiCas9-Blast

Expresses human codon-optimized S. pyogenes Cas9 protein and blasticidin resistance from EFS promoter. 3rd generation lentiviral backbone.

#69982

pY010 (pcDNA3.1-hAsCpf1)

 Expresses humanized AsCpf1

#19319

pLJM1-EGFP

(Empty Backbone) 3rd gen lentiviral vector for EGFP fusion; PGK driven puromycin

#12259

pMD2.G

VSV-G envelope expressing plasmid

#12260

psPAX2 

Lentivirus package plasmids

#61427

lenti sgRNA(MS2)_zeo backbone

(Empty Backbone) 3rd generation lenti sgRNA cloning backbone with MS2 loops at tetraloop and stemloop 2 and EF1a-zeo resistance marker. Contains BsmBI sites for insertion of spacer sequences.

#61426

lenti MS2-P65-HSF1_Hygro

lenti vector encoding the MS2-P65-HSF1 activator helper complex with a 2A Hygro resistance marker (EF1a-MS2-p65-HSF1-2A-Hygro-WPRE)

#61425


lenti dCAS-VP64_Blast

3rd generation lenti vector encoding dCAS9-VP64 with 2A Blast resistance marker (EF1a-NLS-dCas9(N863)-VP64-2A-Blast-WPRE)

#71814

eSpCas9(1.1)

Expresses high specificity SpCas9. Px330-like plasmid.

#47327

pET-28b-Cas9-His

For in vitro expression and purification of Cas9 protein

#62934

pET-NLS-Cas9-6xHis

Expression of NLS-Cas9-6xHis in bacterial cells

86840

pJH373

mamalian expression of AcrIIA2

84750

Lenti-AsCpf1-Blast

Expresses human codon-optimized AsCpf1 protein and blasticidin resistance from EFS promoter. Lentiviral backbone.

84752

Lenti_gRNA-Puro

(Empty Backbone) Expresses Cpf1 customizable sgRNA from U6 promoter and puromycin resistance from EF-1a promoter

79145

pCAG-eCas9-GFP-U6-gRNA

All-in-one CRISPR/Cas9 vector with high-fidelity eSpCas9 expression in human pluripotent stem cells

84745

pY30

Expresses huAsCpf1-P2A-puro and crRNA guide

84743

pY094

Expresses huAsCpf1-T2A-GFP and crRNA guide

84741

pY026

Expresses huAsCpf1 and crRNA guide

60958

PX552

pAAV-U6sgRNA(SapI)_hSyn-GFP-KASH-bGH (SpGuide acceptor). AAV plasmid for sgRNA cloning. GFP-KASH fusion facilitates FACS sorting of cells and nuclei.

79152

pC003 - LshC2C2 locus into pACYC184 for spacer cloning

LshC2c2 locus in pACYC184 with BsaI sites for spacer cloning

79150

pC001 - huLshC2C2-MBP for bacterial expression

Expresses human codon-optimized LshC2c2 for purification in E. coli

64324

pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-mCherry

Expression vector for sgRNAs cloned into the BbsI sites and for expression of Cas9 linked to mCherry via a T2A peptide

64222

pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-mcherry-P2A-Ad4E4orf6

Expression vector for sgRNA and for Expression of Cas9 linked via T2A to mCherry linked to the Ad4 E4orf6 gene via P2A

64218

pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-BFP-P2A-Ad4E1B

Expression vector for sgRNA and for Expression of Cas9 linked to BFP via T2A linked to Ad4 E1B via P2A

64323

pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-BFP

Expression vector for sgRNAs cloned into the BbsI sites and for expression of Cas9 linked to BFP via a T2A peptide

51023

pSLQ1658-dCas9-EGFP

Template for NLS-dCas9-NLS-EGFP fusion protein for CRISPR imaging (the recipient vector can be TetON 3G promoter system)

64108

pHAGE-TO-dCas9-3XmCherry

Expression of Sp dCas9-3XmCherry in mammalian cells

60957

PX551

pAAV-pMecp2-SpCas9-spA (AAV-SpCas9). AAV plasmid expressing Cas9 in neurons under control of truncated mecp2 promoter.

100806

BE4-Gam

Expresses BE4-Gam in mammalian cells

100809

SaBE4-Gam

Expresses SaBE4-Gam in mammalian cells

102917

pCMV-ABE7.8

expresses ABE7.8 in mammalian cells

102919

pCMV-ABE7.10

expresses ABE7.10 in mammalian cells

108382

xCas9(3.7)-ABE(7.10)

Mammalian expression vector for xCas9(3.7)-ABE

 
北京微旋基因技术有限公司
 
联系电话:010-53516075 邮箱:sales@micro-helix.com 地址:北京市西城区德外大街11号康华伟业孵化器A343

会议时间2020-02-22至2020-02-23
会议地点北京

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